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QPCR

簡(jiǎn)要描述:QPCR基于傳統(tǒng)的聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù),通過(guò)逐漸擴(kuò)增目標(biāo)DNA或cDNA的數(shù)量使其可檢測(cè)。與傳統(tǒng)PCR不同的是,qPCR在擴(kuò)增過(guò)程中同時(shí)進(jìn)行熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。

  • 更新時(shí)間:2025-02-17
  • 訪(fǎng)  問(wèn)  量:706
  • 價(jià)格:面議
  • 廠(chǎng)商性質(zhì):生產(chǎn)廠(chǎng)家

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QPCR

實(shí)驗(yàn)原理

QPCR基于傳統(tǒng)的聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù),通過(guò)逐漸擴(kuò)增目標(biāo)DNA或cDNA的數(shù)量使其可檢測(cè)。與傳統(tǒng)PCR不同的是,qPCR在擴(kuò)增過(guò)程中同時(shí)進(jìn)行熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。

qPCR的原理基于熒光探針(例如TaqMan探針或SYBR Green I染料)。這些探針通過(guò)與目標(biāo)序列的特異性結(jié)合,在PCR過(guò)程中釋放熒光信號(hào)。

SYBR Green I:該染料能與DNA雙鏈結(jié)合,當(dāng)PCR擴(kuò)增產(chǎn)生新的雙鏈DNA時(shí),SYBR Green I與其結(jié)合并發(fā)出熒光信號(hào)。

TaqMan探針:該探針由引物和熒光探針組成,熒光探針含有一個(gè)熒光染料和一個(gè)熒光猝滅劑。在PCR擴(kuò)增過(guò)程中,熒光探針通過(guò)引物特異性結(jié)合到目標(biāo)序列上,并且Taqpolymerase酵素的核酸酶活性會(huì)切除掉熒光探針上的猝滅劑,導(dǎo)致熒光染料釋放出信號(hào)。

 通過(guò)檢測(cè)PCR擴(kuò)增過(guò)程中的熒光信號(hào)強(qiáng)度,可以確定目標(biāo)序列相對(duì)起始數(shù)量。通常通過(guò)計(jì)算Ct值(熒光信號(hào)達(dá)到閾值的循環(huán)數(shù))來(lái)衡量目標(biāo)序列的豐度。通過(guò)構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)或使用ΔCt方法,可以將待測(cè)樣本中目標(biāo)序列的相對(duì)豐度與參考基因或?qū)φ战M進(jìn)行比較。

實(shí)驗(yàn)步驟

 提取核酸、反轉(zhuǎn)錄(僅適用于RNA樣本)、預(yù)處理、設(shè)計(jì)引物和探針、準(zhǔn)備反應(yīng)體系、執(zhí)行PCR循環(huán)、數(shù)據(jù)分析

應(yīng)用途徑

1.定量分析未知模板;2.單個(gè)或多個(gè)基因表達(dá)譜分析

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

 

QPCR QPCR

 


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